1. Test for IFN-bindende antistoffer (BAb), oftest udført som screening.
2. tests for IFN-neutraliserende antistoffer (NAb), rapporteret ved
- % neutralisation af tilsat IFN, normalt 10 LU/ml.
- en titer iht. the 10-fold reduction unit method of Kawade-Grossberg.
Tekniske forklaringer er skrevet med skråskrift.

BINDENDE ANTISTOFFER (BAb)

Screeningsanalysen for bindende antistoffer foretages ved protein-G affinitetskromatografi:
Serum, sædvanligvis i 25% endelig concentration, inkuberes med 125I-mærket humant IFN-a/IFN-b, hvorunder eventuelle anti-IFN-alpha (eller anti-IFN-b) antistoffer bindes til traceren. Derefter isoleres antigen-antistofkomplekser på en protein-G søjle, hvorved IgG isoleres - herunder IgG antistofkomplekser. Mængden af bundet tracer måles derpå, og dette svarer til mængden af anti-IFN-beta IgG antistof i serumprøven (anti-IFN-beta antistof af andre Ig klasser forekommer yderst sjældent og i små mængder).

Mængden af anti-IFN-beta IgG antistof i prøven angives som:
% bundet af den tilsatte mængde 125I-IFN-beta.
Da baggrundsværdien i testen + 3 SD er 16%, anføres resultater over 16% som positive. Maksimal binding er ca. 85%.
OBS: Er denne prøve negativ, er der ingen hverken bindende eller neutraliserende IgG antistoffer i prøven. Da et positivt resultat ikke automatisk betyder, at der også findes neutraliserende antistoffer i prøven, suppleres i disse tilfælde med bioassay for neutraliserende antistoffer.

NEUTRALISERENDE ANTISTOFFER (NAb)

Den biologiske analyse for neutraliserende antistoffer udføres som følger:
En særligt udvalgt IFN-følsom cellelinie inficeres med EMC virus -/+ tilsætning af forud bestemt optimal mængde humant recombinant IFN-alpha eller IFN-beta. Dette beskytter cellerne mod virus-induceret drab. Til parallelt opsatte kulturer tilsættes tillige den serumprøve, som skal testes for NAb (sædvanligvis i 5% endelig concentration). Indeholder prøven NAb, vil det tilsatte IFN-a/IFN-beta ikke kunne beskytte mod virusangrebet, og cellerne vil dø afhængig af mængden af neutraliserende antistof (antiviralt neutralisationsbioassay).

OBS: Der inkluderes altid kontroller for indhold i serum af endogen IFN aktivitet og cellebeskadigende stoffer, hvilket gør analysen kompleks og vanskelig at tolke for ikke-specialister.

Vi anbefaler % neutralisation af fixeret mængde IFN (se nedenfor), idet denne etode er økonomisk, sensitiv og klinisk relevant (titerbestemmelse ved 10-fold reduction unit metode udføres på anmodning; se detaljer her).

Graden af neutraliserende anti-IFN antistof angives som:
% neutralisation af IFN effekt med anførsel af en samlet konklusion (se nedenfor).
Samtlige analysesæt udføres i reglen med 2 (3) forskellige sensitiviteter ved tilsætning af 2 (3) forskellige mængder IFN til cellekulturerne. På basis af disse analyser foretages i reglen en samlet konklusion som værende "Negative", "Positive, but the low level makes the clinical implication uncertain" eller "Positive with expected clinical response failure". Såfremt der ikke findes endogen IFN aktivitet eller toxicitet, regnes prøver med < 20% IFN neutralisation sædvanligvis for "Negative".

Yderligere oplysninger findes i følgende artikler.

KB 2003